雙槽梯度PCR儀該怎樣設(shè)置梯度？

　　雙槽梯度PCR儀通常有12種溫度梯度，這樣的儀器就叫梯度PCR儀。因?yàn)楸粩U(kuò)增的不同DNA片段，其退火溫度是不同的，通過(guò)設(shè)置一系列的梯度退火溫度進(jìn)行擴(kuò)增，從而一次性PCR擴(kuò)增，就可以篩選出表達(dá)量高的退火溫度，進(jìn)行有效的擴(kuò)增。主要用于研究未知DNA退火溫度的擴(kuò)增，這樣節(jié)約成本的同時(shí)也節(jié)約了時(shí)間。主要用于科研，教學(xué)機(jī)構(gòu)。梯度PCR儀，在不設(shè)置梯度的情況下也可以做普通PCR擴(kuò)增。具有雙槽梯度的不多，領(lǐng)成具備此功能。
 

　　雙槽梯度PCR儀增加一個(gè)熒光信號(hào)采集系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng)，就成了熒光定量PCR儀。其PCR擴(kuò)增原理和普通PCR儀擴(kuò)增原理相同，只是PCR擴(kuò)增時(shí)加入的引物是利用同位素、熒光素等進(jìn)行標(biāo)記，使用引物和熒光探針同時(shí)與模板特異性結(jié)合擴(kuò)增。擴(kuò)增的結(jié)果通過(guò)熒光信號(hào)采集系統(tǒng)實(shí)時(shí)采集信號(hào)連接輸送到計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng)得出量化的實(shí)時(shí)結(jié)果輸出。把這PCR儀叫做實(shí)時(shí)二手熱循環(huán)儀PCR儀(qPCR儀)。熒光定量PCR儀有單通道，雙通道，和多通道。當(dāng)只用一種熒光探針標(biāo)記的時(shí)候，選用單通道，有多熒光標(biāo)記的時(shí)候用多通道。單通道也可以檢測(cè)多熒光的標(biāo)記的目的基因表達(dá)產(chǎn)物，因?yàn)橐淮沃荒軝z測(cè)一種目的基因的擴(kuò)增量，需多次擴(kuò)增才能檢測(cè)完不同的目的基因片段的量。
 

　　雙槽梯度PCR儀該怎樣設(shè)置梯度？
 

　　一般別的的步驟和普通PCR都一樣，不同在于復(fù)性溫度的設(shè)置，多數(shù)是先設(shè)定一個(gè)復(fù)性溫度的范圍，然后是該范圍內(nèi)的梯度數(shù)，(有的還有0.5和0.2微升EP管之分)，PCR儀會(huì)很據(jù)這兩個(gè)數(shù)據(jù)給出每個(gè)梯度數(shù)的具體溫度，然后你根據(jù)這些溫度選擇接近你所希望的復(fù)性溫度較接近的溫度所在的孔的位置，將ep管插入這些孔即可。