二維梯度PCR實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng)

　　二維梯度PCR其實(shí)就是將多個(gè)的PCR反應(yīng)放在一起做，不用一次一次的作很多次，溫度梯度PCR可以很快的找出適合的退火溫度，或者說(shuō)可以在適合的退火溫度下擴(kuò)增出目的條帶。除具標(biāo)準(zhǔn)PCR儀功能外，其梯度模塊還能同時(shí)進(jìn)行多達(dá)12個(gè)不同退火溫度的PCR反應(yīng)，在梯度模塊上，可實(shí)現(xiàn)對(duì)梯度溫度和梯度寬度等參數(shù)的調(diào)整，自由編程12道溫度，梯度實(shí)現(xiàn)不同樣品的退火溫度并同時(shí)進(jìn)行熱循環(huán)。僅一次實(shí)驗(yàn)就能確定特定體系相應(yīng)的退火溫度。從而可在短時(shí)間內(nèi)對(duì)PCR實(shí)驗(yàn)進(jìn)行優(yōu)化，大大提高PCR科研效率。
 

　　二維梯度PCR實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng)：
 

　　1.戴一次性手套，若不小心濺上反應(yīng)液，立即更換手套；
 

　　2.使用一次性吸頭，嚴(yán)禁與PCR產(chǎn)物分析室的吸頭混用，吸頭不要長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中，避免氣溶膠的污染；
 

　　3.避免反應(yīng)液飛濺，打開反應(yīng)管時(shí)為避免此種情況，開蓋前稍離心收集液體于管底。若不小心濺到手套或桌面上，應(yīng)立刻更換手套并用稀酸擦拭桌面；
 

　　4.操作多份樣品時(shí)，制備反應(yīng)混合液，先將dNTP、緩沖液、引物和酶混合好，然后分裝，這樣即可以減少操作，避免污染，又可以增加反應(yīng)的準(zhǔn)確度；
 

　　5.加入反應(yīng)模板，加入后蓋緊反應(yīng)管；
 

　　6.操作時(shí)設(shè)立陰陽(yáng)性對(duì)照和空白對(duì)照，即可驗(yàn)證PCR反應(yīng)的可靠性，又可以協(xié)助判斷擴(kuò)增系統(tǒng)的可信性；
 

　　7.盡可能用可替換或可高壓處理的加樣器，由于加樣器容易受產(chǎn)物氣溶膠或標(biāo)本DNA的污染，建議使用可替換或高壓處理的加樣器。如沒(méi)有這種特殊的加樣器，至少PCR操作過(guò)程中加樣器應(yīng)該專用，不能交叉使用，尤其是PCR產(chǎn)物分析所用加樣器不能拿到其它兩個(gè)區(qū)；
 

　　8.重復(fù)實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證結(jié)果，慎下結(jié)論。
 

　　二維梯度PCR應(yīng)用領(lǐng)域：分子生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、食品工業(yè)、司法科學(xué)、生物技術(shù)、環(huán)境科學(xué)、微生物學(xué)、臨床診斷、流行病學(xué)、遺傳學(xué)、基因芯片、基因檢測(cè)、基因克隆、基因表達(dá)等領(lǐng)域以聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Picymerase Chain Reaction，PCR)為特征的、以檢測(cè)DNA/RNA為目的的各種病原體檢測(cè)及基因分析。