寵物檢測PCR技術中為什么要3次循環才能得到目的基因？

　　寵物檢測PCR是一種體外模擬自然DNA復制過程的核酸擴增技術，亦稱為無細胞分子克隆技術。它是以待擴增的兩條DNA鏈為模板，在一對人工合成的寡核苷酸引物的介導下，通過耐高溫DNA聚合酶的酶促作用，快速特異地擴增出特定的DNA片斷。

　　反應時，首先在摩爾數大大過量的兩段引物及四種dNTP參與下對模板DNA進行加熱變性；隨之，將反應混合液冷卻到某一溫度，這一溫度可使引物與它的靶序列退火；后退火引物在DNA聚合酶作用下得以延伸。如此反復進行變性、退火此和DNA合成這一循環。由于一輪擴增的產物又充當下一輪擴增的模板，所以在這一周而復始的過程中每完成一個循環，就基本上使目的DNA產物增加一倍。這一指數反應的主產物是一段雙鏈DNA，它的兩個末端由寡核苷酸引物端來決定，而長度則取決于兩引物間的距離。

　　早期的PCR方法采用大腸桿菌DNA聚合酶I的Klenow片斷催化退火的寡核苷酸引物進行延伸反應由于該酶會在進行DNA變性的溫度下失活，所以在每一輪合成反應中都須重新加1份酶。并且在擴增較長模板是效果不夠理想，產率較低有一些錯配，導致產物大小不均。

　　寵物檢測PCR技術中為什么要3次循環才能得到目的基因？

　　1、一個循環擴增出來的新片段很長很長。

　　2、二個循環以新的長片段為模板進行，但新片段的一端是引物開頭的，所以第二個循環得到的片段就是我們需要的長度，但只是一條鏈，所以還不能分離出目的基因。

　　3、三個循環，當以第二個循環得到的新片段為模板時，因為這個片段的長度就是需要擴增的長度，當第三個循環完成時，這個片段是需要的長度，且是雙鏈DNA,這就得到了需要的目的基因了。