寵物檢測(cè)PCR技術(shù)中為什么要3次循環(huán)才能得到目的基因？

　　寵物檢測(cè)PCR是一種體外模擬自然DNA復(fù)制過(guò)程的核酸擴(kuò)增技術(shù)，亦稱為無(wú)細(xì)胞分子克隆技術(shù)。它是以待擴(kuò)增的兩條DNA鏈為模板，在一對(duì)人工合成的寡核苷酸引物的介導(dǎo)下，通過(guò)耐高溫DNA聚合酶的酶促作用，快速特異地?cái)U(kuò)增出特定的DNA片斷。

　　反應(yīng)時(shí)，首先在摩爾數(shù)大大過(guò)量的兩段引物及四種dNTP參與下對(duì)模板DNA進(jìn)行加熱變性；隨之，將反應(yīng)混合液冷卻到某一溫度，這一溫度可使引物與它的靶序列退火；后退火引物在DNA聚合酶作用下得以延伸。如此反復(fù)進(jìn)行變性、退火此和DNA合成這一循環(huán)。由于一輪擴(kuò)增的產(chǎn)物又充當(dāng)下一輪擴(kuò)增的模板，所以在這一周而復(fù)始的過(guò)程中每完成一個(gè)循環(huán)，就基本上使目的DNA產(chǎn)物增加一倍。這一指數(shù)反應(yīng)的主產(chǎn)物是一段雙鏈DNA，它的兩個(gè)末端由寡核苷酸引物端來(lái)決定，而長(zhǎng)度則取決于兩引物間的距離。

　　早期的PCR方法采用大腸桿菌DNA聚合酶I的Klenow片斷催化退火的寡核苷酸引物進(jìn)行延伸反應(yīng)由于該酶會(huì)在進(jìn)行DNA變性的溫度下失活，所以在每一輪合成反應(yīng)中都須重新加1份酶。并且在擴(kuò)增較長(zhǎng)模板是效果不夠理想，產(chǎn)率較低有一些錯(cuò)配，導(dǎo)致產(chǎn)物大小不均。

　　寵物檢測(cè)PCR技術(shù)中為什么要3次循環(huán)才能得到目的基因？

　　1、一個(gè)循環(huán)擴(kuò)增出來(lái)的新片段很長(zhǎng)很長(zhǎng)。

　　2、二個(gè)循環(huán)以新的長(zhǎng)片段為模板進(jìn)行，但新片段的一端是引物開(kāi)頭的，所以第二個(gè)循環(huán)得到的片段就是我們需要的長(zhǎng)度，但只是一條鏈，所以還不能分離出目的基因。

　　3、三個(gè)循環(huán)，當(dāng)以第二個(gè)循環(huán)得到的新片段為模板時(shí)，因?yàn)檫@個(gè)片段的長(zhǎng)度就是需要擴(kuò)增的長(zhǎng)度，當(dāng)?shù)谌齻€(gè)循環(huán)完成時(shí)，這個(gè)片段是需要的長(zhǎng)度，且是雙鏈DNA,這就得到了需要的目的基因了。