迷你梯度PCR儀常用的五種分析方法

　　迷你梯度PCR儀的梯度溫度控制是一項(xiàng)可有助于PCR中引物退火優(yōu)化的功能。 梯度設(shè)定的目的是在模塊之間實(shí)現(xiàn)變化的溫度，通過(guò)每列之間≥2°C的間隔溫度升降，使得可同時(shí)對(duì)于一系列的溫度進(jìn)行測(cè)試以獲取引物退火溫度。該技術(shù)的一種形式便是設(shè)計(jì)帶有三個(gè)或更多分割金屬模塊的PCR儀，每一模塊都具有獨(dú)立的加熱和冷卻元件。 相比于梯度模塊，該模塊設(shè)計(jì)可帶來(lái)活設(shè)置三種或更多不同溫度的能力，以便使得每個(gè)獨(dú)立的區(qū)域都能進(jìn)行更好的溫度控制，特別是在優(yōu)化過(guò)程中。

　　獨(dú)立金屬模塊的絕熱性阻止了模塊之間的熱交換。 這就可實(shí)現(xiàn)更為準(zhǔn)確的模塊溫度控制，確保模塊之間實(shí)現(xiàn)線性的溫度變化。

　　迷你梯度PCR儀分析方法：

　　·凝膠電泳分析：PCR產(chǎn)物電泳，EB溴乙錠染色紫外儀下觀察，初步判斷產(chǎn)物的特異性。PCR產(chǎn)物片段的大小應(yīng)與預(yù)計(jì)的一致，特別是多重PCR，應(yīng)用多對(duì)引物，其產(chǎn)物片斷都應(yīng)符合預(yù)評(píng)的大小，這是起碼條件。

　　·瓊脂糖凝膠電泳：通常應(yīng)用1~2%的瓊脂糖凝膠，供檢測(cè)用。

　　·聚丙烯酰胺凝膠電泳：6~10%聚丙烯酰胺凝膠電泳分離效果比瓊脂糖好，條帶比較集中，可用于科研及檢測(cè)分析。

　　·酶切分析：根據(jù)PCR產(chǎn)物中限制性內(nèi)切酶的位點(diǎn)，用相應(yīng)的酶切、電泳分離后，獲得符合理論的片段，此法既能進(jìn)行產(chǎn)物的鑒定，又能對(duì)靶基因分型，還能進(jìn)行變異性研究。

　　·分子雜交：分子雜交是檢測(cè)PCR產(chǎn)物特異性的有力證據(jù)，也是檢測(cè)PCR產(chǎn)物堿基突變的有效方法。